GENERACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UNA CEPA RECOMBINANTE DE Bacillus thuringiensis QUE EXPRESE UNA VERSIÓN TRUNCADA DE LA ENDOQUITINASA CHIA74

Resumen

Bacillus thuringiensis es el bioinsecticida más conocido y empleado del mundo. Su actividad se debe principalmente, al efecto de proteínas Cry y Cyt, las cuales actúan de manera sinérgica con otras biomoléculas tales como quitinasas, proteínas insecticidas vegetativas, proteasas, parasporinas y bacteriocinas. Las quitinasas, en particular, son secretadas por B. thuringiensis para hidrolizar la quitina para su uso como fuentes de carbono y nitrógeno. ChiA74, una endoquitinasa de B. thuringiensis, tiene una estructura modular que incluye una secuencia de péptido señal de secreción (sp), y los dominios catalítico (CD), de inserción de quitina (CID), fibronectina de tipo III (FnIII) y de unión a quitina (CBD). Por medio de técnicas de PCR y ligación de los productos generados, además del uso de enzimas de restricción, se generaron dos versiones truncadas de chiA74 sin péptido señal que, además carecen respectivamente de los dominios CBD y CDB – FnIII, las cuales se clonaron en la cepas Top 10 y ET-1256 de E.coli y, finalmente en HD1 de B. thuringiensis para su caracterización por medio de geles de poliacrilamida para proteínas y zimogramas con el fin de analizar la actividad enzimática de ambas versiones truncadas de la endoquitinasa, obteniendo como resultado la expresión de ambas.