Detección de Listeria spp. en leche mediante un método de amplificación isotérmica

Resumen

La Listeriosis es una enfermedad transmitida por alimentos (ETA) causada por Listeria monocytogenes que puede provocar grandes cuadros clínicos. Los alimentos contaminados incluyen leche sin pasteurizar, carne y pescado crudos. En México, la falta de estadísticas limita el control epidemiologico, a diferencia de Estados Unidos, donde la listeriosis es la tercera causa de muerte por ETA, subrayando la necesidad de detección eficaces. Los métodos tradicionales requieren hasta 4 días para obtener resultados, mientras que técnicas moleculares como la PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y LAMP (amplificación isotérmica mediante bucle) ofrecen resultados rápidos y específicos. En este trabajo se desarrolló un método de detección visual basado en LAMP para la detección de L. monocytogenes y L. innocua en leche utilizando oligonucleótidos que amplifican para la región V2-V3 del ADNr 16S. La amplificación se realizó utilizando el reactivo WarmStart Colorimetric (New England Biolabs), se determinó que la temperatura óptima de reacción es 64.1°C, y la detección puede ser visualizada desde los 60 min. Al desarrollar curvas de calibración para L. monocytogenes y L. innocua e inocular artificialmente con 1X109 UFC/mL leche pasteurizada y cruda, se detectó la presencia de Listeria spp. utilizando como templado un protocolo de extracción sencillo basado en la disrupción celular por ebullición.